N端测序是蛋白质组学研究的技术之一，其中艾德曼降解法（Edman Degradation）长期以来被认为是测定蛋白或多肽N端序列的经典方法。该方法基于苯硫酰异氰酸酯（PITC）对N端氨基酸的选择性标记，并通过逐步降解实现氨基酸序列的解析。尽管近年来基于质谱的测序技术迅速发展，但艾德曼降解法仍在某些特定情况下具有优势，并且通过改进策略可以进一步提升其适用性。

一、艾德曼降解法的N端测序的优势

1、序列解析的直接性

艾德曼降解法可直接从N端顺序解析氨基酸残基，无需依赖数据库匹配。这对于研究未知蛋白或非模式生物的蛋白质序列尤其有价值。

2、氨基酸定量能力

该方法能够精确测定N端氨基酸残基的含量，使其在蛋白质修饰（如乙酰化、甲酰化）或同源蛋白鉴定中具有应用。

3、适用于小分子量蛋白和多肽

艾德曼降解法特别适用于测定小于50个氨基酸的小分子蛋白或肽段，在抗体表位映射、短肽鉴定等领域仍被广泛应用。

4、避免质谱数据复杂性

质谱分析常会因离子碎裂模式、翻译后修饰及样本复杂度带来数据解读的挑战，而艾德曼降解法能够直接读取N端氨基酸序列，减少数据分析难度。

二、艾德曼降解法的N端测序的局限性

1、对N端封闭蛋白无效

许多蛋白在翻译后会经历N端修饰（如乙酰化、甲酰化或蛋白酶加工），导致艾德曼降解无法识别被修饰的N端残基。

2、测序长度有限

由于循环降解过程中氨基酸逐步释放，每个降解周期都会带来损耗，使得艾德曼降解法通常只能解析10-50个氨基酸长度的序列，难以处理长肽或完整蛋白。

3、对蛋白量要求高

艾德曼降解法对起始蛋白样本量有较高需求，通常需要pmol级别的蛋白，限制了其在超低丰度蛋白中的应用。

4、时间和成本较高

相较于高通量质谱技术，艾德曼降解法需要较长时间完成循环降解，同时试剂成本较高，限制了其大规模应用。

三、改进措施与优化策略

1、前处理优化以减少N端封闭影响

针对N端修饰问题，可采用化学或酶促方法解除N端封闭。例如，碱性水解可部分去除N端乙酰基，而使用胰蛋白酶或AspN等酶特异性剪切蛋白，则可在非N端位置形成新N端，从而提高N端测序成功率。

2、微量样品的增强策略

通过改进荧光或放射性标记技术，提高检测灵敏度，使得纳摩尔甚至飞摩尔级别的样本亦可用于艾德曼降解分析。此外，高效样品固定基质（如PVDF膜）有助于减少样品损耗，提高测序成功率。

3、结合质谱技术提高解析能力

艾德曼降解法与质谱联用（如Edman-MS）可以结合两者的优势进行N端测序，前者用于解析N端序列，后者用于完整蛋白序列的覆盖补充。例如，先通过艾德曼降解获得N端部分序列，再利用质谱进行深度解析，从而提高蛋白鉴定的准确性。

4、自动化与高通量化发展

近年来，自动化艾德曼降解系统（如Procise或 PPSQ 系列）已提高了该方法的效率和可重复性。此外，通过微流控技术优化反应体系，可进一步缩短反应时间，并减少试剂消耗，为高通量蛋白组学研究提供新思路。

艾德曼降解法作为传统的N端测序方法，在特定研究场景下仍具有不可替代的优势。尽管其局限性较为明显，但通过优化样品前处理、增强微量检测能力、结合质谱技术及实现自动化改进，该方法仍能在现代蛋白质组学研究中发挥作用。百泰派克生物科技提供优质的基于Edman降解的蛋白N端序列分析服务，欢迎联系我们！

百泰派克生物科技特色项目

一、蛋白测序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos质谱仪及岛津公司埃德曼降解测序系统对蛋白质序列进行分析，提供基于质谱的蛋白测序分析服务，包括对蛋白质的氨基酸组成分析，N端测序，C端测序和全序列分析，以及基于埃德曼降解的蛋白质N端序列分析服务。对于未知理论序列的蛋白质，提供基于从头测序法的蛋白质从头测序服务，对蛋白序列进行分析。

※服务优势：

1.采用目前世界上先进的质谱仪器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可实现对所测定靶蛋白序列 100% 的覆盖;

3.可测定蛋白N端多达 70个氨基酸序列;

4.可测定多种形式的样品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白条带;

5.样品用量低: 蛋白样品仅需 5-10ug，即可完成检测;

6.测序不受N端封闭，PEC和和糖基化等N端修饰的影响。

二、蛋白质组学

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos质谱平台结合Nano-LC，提供定量蛋白质组学、靶向蛋白质组学、多肽组学、翻译后修饰蛋白组学等多种蛋白质组学分析服务。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4D蛋白质组学服务，助力微量样本蛋白组学、大样本群医学及高通量修饰组学等研究工作。

※服务优势：

1 .高通量定量蛋白分析:多对照组大规模实验分析，发现新的生物标记物;

2.体内体外多种蛋白质标记方法，适用于分析组织、细胞、血液等多种样品;

3.质谱分析灵敏度高，实验结果重复度高;

4.可检测较低丰度蛋白，线性范围广;

5.专业生物信息学分析，分析更系统准确。

三、单细胞质谱流式技术分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm质谱流式系统进行单细胞质谱流式技术分析，采用金属元素标记物（通常是金属元素标记的特异抗体）标记细胞表面和内部的分子，然后用流式细胞原理分离单个细胞，再用电感耦合等离子体质谱（ICP-MS）分析单个细胞的原子质量谱，最后将原子质量谱数据转换为细胞表面和内部的信号分子表达量。

※服务优势：

1.技术先进，填补技术空白

采用金属标记抗体技术，避免了传统流式荧光通道少且易相互影响的问题。可在单细胞层面上对多种指标同时进行表征，百泰派克生物科技可做到同时检测51个目标蛋白。

2.分析数量大，成本较低

单细胞RNAseq受成本等因素限制，所有样本细胞汇总的分析数目一般在2x10^4个左右，而流式质谱技术一次（单样本）就可分析至少10^5的细胞，实现了数量级的提高，且成本不高于单细胞RNAseq。

3.应用前景大

①流式质谱结果可以给出细胞亚群的变化，在临床诊断、疾病机制研究等方面具有极大的研究前景；

②将金属标签技术与其他技术结合会有新应用方向。除常规蛋白外，质谱流式细胞技术还可用于蛋白翻译后修饰；

③可检测细胞存活率、细胞大小、mRNA转录子表达量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

四、基于高精度质谱的免疫多肽组学分析及新抗原发现

百泰派克生物科技的基于高精度质谱的免疫多肽组学分析及新抗原发现一站式解决方案包括我们专有的、高度敏感的免疫肽富集和鉴定方案。我们能够帮助您实现10,000个以上I型多肽和10,000个以上II型多肽的鉴定和识别。通过我们优化的高通量免疫多肽组学分析平台进行免疫肽组学分析，可从最小的样品材料中进行可重复的识别和定量。该服务可以应用于大规模的研究，旨在助力科研工作者寻找癌症、免疫疾病及传染病的解决方案，深入挖掘未知的靶标。

五、生物药物表征

百泰派克基于高分辨率质谱技术，MALDI TOF，高效色谱分离技术，提供一系列完善的生物药物分析方案，从蛋白质、多肽、抗体、疫苗等生物制品的氨基酸组成和一级结构分析，到产品变异性和纯度分析。旨在提供优质生物药物分析服务，帮助生物医药生产商提高生物药物品质。

百泰派克生物科技七大检测平台

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物质谱多组学优质服务商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于为生物/制药和医疗器械行业提供质量控制检测和项目验证等专业服务。公司实验室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法规和指导原则，通过CNAS/ISO9001双重质量体系认证，建立了完备的质量体系，数据冷热/异地备份，设备定期计量/期间核查，软件审计追踪，为客户提供一体化解决方案和技术服务，支持新药研发、药物申报注册和生产放行。

1.公司采用ISO9001质量控制体系，专业提供以质谱为基础的CRO检测分析服务；

2.获国家CNAS实验室认可，为客户提供符合全球药政法规的药物质量研究服务；

3.业务范围覆盖蛋白质组学、多肽组学、代谢组学、生物药物表征、单细胞分析、单细胞质谱流式、生信云分析以及多组学生物质谱整合分析等；

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